Korak 1: Rastvorite sirovi Melanotan I peptid u 100 mL prečišćene vode i filtrirajte smešu kroz 0,45 μm membranu da biste dobili sirovi rastvor peptida.
Korak 2: Pročistite sirovi Melanotan I peptid pomoću tečne hromatografije visokih performansi (HPLC). Koristite DAC-HB50 dinamičku aksijalnu kompresijsku kolonu sa gradijentnim procesom eluiranja, koristeći mobilnu fazu A (0,05 wt% trifluorosirćetne kiseline u vodi) i mobilnu fazu B (0,05 wt% trifluorosirćetne kiseline u acetonitrilu). Pratite uzorak pomoću UV detektora i sakupite rastvor peptida koji odgovara ciljanom vrhuncu u frakcijama.
Korak 3: Nakon HPLC prečišćavanja, dobiti 180 mL rastvora Melanotan I trifluoroacetata čistoće preko 99%; koncentrirati se rotacijskim isparavanjem kako bi se dobilo 50 mL otopine.
Step 4: Equilibrate the chromatography column with deionized water and load the sample (50 mL of the Melanotan I trifluoroacetate solution with >99% čistoće). Eluirati 50 minuta koristeći 2% vodeni sistem sirćetne kiseline. Sakupljeni ciljni proizvod koncentrirati na 80 mL rotacijskim isparavanjem, a zatim ga podvrgnuti procesima pred{6}}liofilizacije i liofilizacije. Na kraju, dobijete 5,33 g Melanotan I peptida visoke - čistoće, što predstavlja prinos od 32,33%.